产品名称：Pharmingen Transcription Factor Buffer Set

产品货号：562574

产品说明：

应用: 细胞内染色（流式细胞仪）（常规测试）

产品描述

BD Pharmingen™转录因子缓冲液套装优化用于在免疫荧光染色和表达特定胞质内和核内蛋白的细胞的流式细胞术分析之前固定和透化细胞。BD Pharmingen™转录因子缓冲液组旨在提高易用性和小化处理时间，减少非特异性染色，提高阳性染色细胞的分辨率，并显着减少固定，透化和染色过程中的细胞损失。使用BD Pharmingen TM转录因子缓冲液组改善了已知在各种细胞内区室内表达的许多蛋白质，尤其是转录因子的流式细胞术检测。已发现该缓冲系统可用于固定和透化来自不同人和小鼠组织的各种细胞类型。缓冲系统可灵活地支持多孔板高通量和大量样品分析以及需要隔夜样品存储的应用。缓冲系统对加工细胞的光散射和自发荧光特性的影响小，导致与新鲜制备的，高度存活的原代细胞所观察到的特征相似的特征。在许多情况下，发现缓冲系统在细胞固定和透化之前和之后都与细胞表面抗原的免疫荧光染色相容。缓冲系统还与许多串联荧光染料兼容。缓冲系统可灵活地支持多孔板高通量和大量样品分析以及需要隔夜样品存储的应用。缓冲系统对加工细胞的光散射和自发荧光特性的影响小，导致与新鲜制备的，高度存活的原代细胞所观察到的特征相似的特征。在许多情况下，发现缓冲系统在细胞固定和透化之前和之后都与细胞表面抗原的免疫荧光染色相容。缓冲系统还与许多串联荧光染料兼容。缓冲系统可灵活地支持多孔板高通量和大量样品分析以及需要隔夜样品存储的应用。缓冲系统对加工细胞的光散射和自发荧光特性的影响小，导致与新鲜制备的，高度存活的原代细胞所观察到的特征相似的特征。

产品介绍：

细胞内染色方案

1.固定：细胞表面染色程序完成后，吸出残留的染色缓冲液并通过短暂涡旋松开细胞沉淀。向每个管中加入1mL新鲜制备的1x Fix / Perm缓冲液工作溶液，并通过涡旋振荡约3秒重悬细胞沉淀。将样品在2-8°C孵育40-50分钟，避光。

2洗涤：将1ml 1x Perm /洗涤缓冲液直接加入悬浮在1x Fix / Perm缓冲液中的固定和透化细胞中。离心沉淀细胞。（注意：Fix / Perm后的所有离心步骤均为350 g ，在2-8°C下进行6分钟）。倾倒或吸出上清液。

3.洗涤：向沉淀的细胞中加入2ml 1x Perm /洗涤缓冲液，然后离心。倾析或吸出洗涤缓冲液。

4.细胞内染色：向细胞样品中加入80-100μl的1x Perm / Wash Buffer和对细胞内蛋白质特异的荧光抗体（如FoxP3，T-bet和/或IL-17A）和非特异性对照染色（例如，匹配荧光Ig同种型对照）到每个管。涡旋管或支架10秒钟，在2-8°C温育40-50分钟，避光。

5洗涤：在洗涤之前简单地涡旋样品。用2ml 1x Perm /洗涤缓冲液洗涤细胞。离心细胞。倾倒或吸出洗涤缓冲液。

6.洗涤：用2ml 1x Perm / Wash洗涤细胞。离心细胞。倾析或吸出洗涤缓冲液。

7.用于流式细胞术的样品制备：将细胞沉淀重悬于350μl流式细胞术染色缓冲液中。使用流式细胞仪分析细胞并获取数据。

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