产品名称：GE Ficoll Paque Premium 淋巴细胞分离液        

产品货号：17-5442-02

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产品名称：Ficoll Paque Premium,1.077g/mL 淋巴细胞分离液 

产品货号：17-5442-02

产品说明：

Ficoll-Paque PREMIUM系列有1.073，1.077，1.084 g/ml三种密度可供选择。

用于通过密度梯度离心从外周血、骨髓和脐带血中制备不同密度的人单个核细胞

生产过程符合GMP、ISO 13485:2003及美国药典(USP)标准

无菌即用型

通过检验确证，内毒素含量很低(＜0.12 EU/ml)

Ficoll-Paque PREMIUM有RSF文件，

Ficoll-Paque PREMIUM改良于Ficoll-Paque PLUS，后者作为一种从骨髓、外周血和脐带血中高得率分离单个核细胞的无菌密度梯度介质已应用了三十多年。与Ficoll-Paque PLUS不同的是，Ficoll-Paque PREMIUM的生产是在严格控制环境下完成的, 生产条件符合ISO 13485:2003标准，GMP认证和美国药典的建议，可用于生产细胞治疗相关产品。

产品介绍：

采用推荐的方法分离人外周血获得的单核细胞悬液具有以下特点：

● 分离所得的细胞中95 ± 5%为单核细胞

● 分离所得的细胞存活细胞率 > 90%

● 可回收原始的血液样本中60 ± 20%的单核细胞

● 3 ± 2%的粒细胞

● 5 ± 2%的红细胞

应用

Ficoll-Paque PREMIUM

用于从人外周血，骨髓和脐带血中分离单个核细胞

Ficoll-Paque PREMIUM 1.084

用于分离较高密度的人单核细胞，还可以用于分离小鼠和大鼠的血细胞

Ficoll-Paque PREMIUM 1.073

用于分离较低密度的人单核细胞, 如基质细胞或单核细胞

Ficoll-Paque PREMIUM密度为1.077 g/ml，经过优化用于从人

外周血分离单核细胞，所采用的方法为由Boyum (3) 改进的

简便快速的离心方法。此介质亦可用于从包括骨髓和脐带血

等组织来源中分离人单核细胞。采用推荐的方法分离人外周

密度梯度离心原理

见图，以人外周血为例，血液加入Ficoll-Paque密度梯度分离液后离心分层，从上到下分四层：

血浆层

单个核细胞层：淋巴细胞、单核细胞、血小板（骨髓和脐带血等样本还有间充质干细胞）

Ficoll-Paque分离液层：密度1.077g/mL

红细胞、粒细胞层

红细胞和多形核粒细胞比重较大，为1.092左右，而淋巴细胞和单核细胞比重较小，为1.075～1.090。Ficoll-Paque密度1.077g/mL介于两者之间，并且分离液中的Ficoll PM400是一种高聚糖，能促进红细胞凝集。

操作步骤

使用前把Ficoll-Paque density gradient media加热到18°C - 20°C。若样本量超过3mL，换用直径更大的离心管，以保证Ficoll-Paque 分离液：2.4 cm，血液样本：3.0 cm的高度。

样本制备

使用新鲜血液确保所分离的单个核细胞的活性。样本也要加热到18°C - 20°C。

1. 10mL离心管加入2mL抗凝血和等量的平衡盐溶液。

2. 颠倒或吸管混匀血液和缓冲液。

单个核细胞分离步骤

1. Ficoll-Paque试剂瓶颠倒多次混匀。

注射器法吸取Ficoll-Paque分离液：

见图，去掉聚丙烯盖，插入注射器针头。

吸管法吸取Ficoll-Paque分离液：

去掉聚丙烯盖，拉起铝环，拉开金属密封，移除银环。拿掉橡胶密封，无菌操作吸取需要的Ficoll-Paque分离液。

离心管加入3mLFicoll-Paque分离液。

稀释过的血液样本小心铺到Ficoll-Paque分离液上面。

注意：铺样本时小心不要和Ficoll-Paque分离液混合。

离心400g，30-40min。18°C - 20°C。

用无菌吸管吸掉上层血浆和血小板，不要碰到单个核细胞层（图4，图5）。

无菌吸管转移单个核细胞层到无菌离心管。

洗涤分离细胞

1. 预估转移的单个核细胞的体积。加入至少3倍体积的平衡盐溶液（约6mL）。

2. 用吸管轻柔重悬细胞。

3. 离心，400-500g，10-15min，18°C - 20°C。

注意：高速离心会加速单个核细胞的回复。但是，低速离心（60-100g）能去除血小板。

4. 去掉上清。

5. 6-8mL平衡盐溶液重悬单个核细胞。

6. 离心，400-500g（或60-100g），10min，18°C - 20°C。

7. 去上清。

8. 使用下游所需液体重悬细胞沉淀。

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