产品名称：南美胎牛血清

产品货号：10270-106

品牌：Gibco

货号：10270-106

规格：500ML

来源：SOUTH AMERICA

级别：优等

关于细胞不贴壁原因及解决办法：

胰蛋白酶消化过度

支原体污染

培养基pH值过碱（NaHCO3分解）            

细胞老化

接种细胞起始浓度太低或太高

解决方法：

缩短胰蛋白酶消化时间或降低胰蛋白酶浓度

分离培养物，检测支原体。清洁支架或培养箱。如发现支原体污染，丢弃培养物

启用新的保种细胞

调节*接种细胞浓度

产品介绍：

收到血清后血清中因含有许多蛋白质，反复冻融对蛋白的活性肯定会有一定的影响，这似乎已*。因此，如果几次内用不完，应尽量分装，这不仅适用于血清，也适用于其他储存于-20℃的蛋白质类产品。

曾有研究发现，血清冻融三次，对肿瘤标志物的浓度影响不大，对于血浆，有报道在短时间内反复冻融三次，对总蛋白、白蛋白和免疫球蛋白含量影响不大，但作者推测对免疫球蛋白的活性有影响2。zui重要的是一篇西北民族学院的文章，《反复冻融新生牛血清对促细胞生长效应的影响》，作者针对SP2/0细胞，用MEM培养基和三批新生牛血清进行培养。血清分别冻融4次至28次不等。然后绘制细胞生长曲线，根据公式t =T/A , A=log2 Y/X计算细胞倍增时间（t 为细胞倍增时间， Y 为细胞峰值前1 d 的细胞数， X 为接种细胞数， T 为细胞生长时间）。结果显示：选用的三批新生牛血清在反复冻融 28 次时， 血清促细胞生长的zui大增殖量变化不大，均高于1×106/mL, 但是血清促细胞生长的倍增时间在反复冻融 20次时延长， 即血清促细胞繁殖一代所需的时间在冻融次数达到 20 次时显著增加。笔者观察了一下该文章的结果列表，发现在冻融20次之前，细胞倍增时间延长2-3小时不等，20次时，则延长3-4小时。可见，影响还是比较显著的。该文章的局限是针对新生牛血清，而没有对胎牛血清进行测试。

国外有人对大鼠血清中的18种化学成分进行了检测，发现反复冻融3次对其中的14种成分没有显著影响，其他肌酸激酶，甘油三酯，葡萄糖，胆红素，甚至包括氯离子有一些明显变化，但其浓度变化控制在10%以内。

总而言之，如果能避免牛血清的反复冻融，及时分装，那是的。如果在短时间内有几次反复冻融，也不用过于担心。但是，对于胎牛血清，还有一个问题，是反复冻融增高了血清产生沉淀或浑浊的风险。因为血清在融化时，冰块和蛋白融化的速度是不一样的，局部可能因蛋白浓度过高而产生沉淀。同时，如果血清内含有少量纤维蛋白原，那么在低温下也可以形成絮状沉淀，等到血清再融化时，沉淀就显现出来了。所以，血清的质量也非常重要。

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