Lonza支原体检测试剂盒利用荧光染料检测步骤
Lonza支原体检测试剂盒是利用荧光染料(bisbenzimide,Hoechst33258)检测支原体污染
Lonza支原体检测试剂盒操作步骤:
贴壁细胞:
1、被检细胞接种于无菌的6孔细胞培养板中,接种密度为1-2×104。同时,接种正常无支原体感染的同种细胞,作为阴性对照。
2、5天后,先吸去培养液,再加入1ml的固定液,静置20min,
3、吸去固定液,晾干。
5、吸去Hoechst33258工作液,加入2ml灭菌超纯水洗涤三次,直接风干。风干后加入一滴封片液,并以盖玻片覆盖。
6、荧光显微镜观察。用紫外激发光激发,观察细胞周围是否有蓝色荧光小点或串珠状荧光小点。
悬浮细胞:
1、收集需检测的细胞,1500rpm,5min。
2、将收集的细胞涂片于载玻片上,再加1ml的固定液,静置20min。
3、吸去固定液,晾干。
4、于每孔中,加入1ml的Hoechst33258工作液(Hoechst33258工作液须覆盖全部被检细胞),37℃避光放置15~20min或室温静置20~30min。
5、吸去Hoechst33258工作液,用无菌水洗涤玻片3次,直接风干。风干后加入一滴封固液,并以盖玻片覆盖。
6、荧光显微镜观察。用紫外激发光激发,观察细胞周围是否有蓝色荧光小点或串珠状荧光小点。
结果判断(参考):
阴性:仅见细胞的细胞核呈现黄绿色荧光。
阳性:除细胞外,细胞周围可见大量的大小均一的荧光着色颗粒。