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伯乐丙烯酰胺在使用中极为突出的优点
点击次数:841 发布时间:2017-09-18
伯乐丙烯酰胺是一种常用的电泳基质,由丙烯酰胺与共单体交联剂的自由基聚合而成。可靠的电泳结果取决于这一反应的可重复性,高纯度的起始试剂是影响凝胶质量的一个重要因素。伯乐丙烯酰胺经过严格的纯化和测试,具有均衡聚合所需的一切品质。丙烯酰胺有3种形式,可满足每个实验室的需要:1.丙烯酰胺粉剂— 丙烯酰胺和甲叉双丙烯酰胺粉剂,浓度和丙烯酰胺/ bis 比率可调。2.预混合丙烯酰胺/ 甲叉双丙烯酰胺粉剂— 含量固定的Bio-Rad 99.9% 超纯丙烯酰胺和甲叉双丙烯酰胺。直接加入 一定量的超纯水即可配制成30-50% 的储存液。3.丙烯酰胺溶液— 可直接使用,有2 种浓度(30% 和40%),3 种丙烯酰胺/ bis 比(19 :1,29 :1 和37.5 :1)
伯乐丙烯酰胺有以下优点:
①伯乐丙烯酰胺是由丙烯酰胺和N,N'甲叉双丙烯酰胺聚合而成的大分子。凝胶有 格子是带有酰胺侧链的碳-碳聚合物,没有或很少带有离子的侧基,因而电渗作用比较小,不易和样品相互作用。
②由于伯乐丙烯酰胺是一种人工合成的物质,在聚合前可调节单体的浓度比,形成 不同程度交链结构,其空隙度可在一个较广的范围内变化,可以根据要分离物质分子 的大小,选择合适的凝胶成分,使之既有适宜的空隙度,又有比较好的机械性质。一般说来,含丙烯酰胺7-7.5%的凝胶,机械性能适用于分离分子量范围不1万至100万物 质,1万以下的蛋白质则采用含丙烯酰胺15-30%的凝胶,而分子量特别大的可采用含 丙烯酰胺4%的凝胶,大孔胶易碎,小孔胶则难从管中取出,因此当丙烯酰胺的浓度增 加时可以减少双含丙烯酰胺,以改进凝胶的机械性能。
③在一定浓度范围伯乐丙烯酰胺对热稳定。凝胶无色透明,易观察,可用检测仪直接测定。
④伯乐丙烯酰胺是比较纯的化合物,可以精制,减少污染。合成伯乐丙烯酰胺的原料是丙烯酰胺和甲撑双丙烯酰胺。丙烯酰胺称单体,甲撑双丙烯酰胺称交联剂,在水溶液中,单体和交联剂通过自由基引发的聚合反应形成凝胶。
在伯乐丙烯酰胺形成的反应过程中,需要有催化剂参加,催化剂包括引发剂和 另速剂两部分。引发剂在凝胶形成中提供始自由基,通过自由基的传递,使丙烯酰胺 成为自由基,发动聚合反应,加速剂则可加快引发剂放自由基的速度。聚丙烯酰胺凝胶电泳可分为连续的和不连续的两类,前者指整个电泳系统中所用缓冲 液,pH值和凝胶网孔都是相同的,后者是指在电泳系统中采用了两种或两种以上的缓 冲液,pH值和孔径,不连续电泳能使稀的样品在电泳过程中浓缩成层,从而提高分辨能力。
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