神经干细胞培养的大致步骤

    神经干细胞是一类能生成神经组织货源与神经组织、具有自我更新能力、并能通过不对称分裂能生成不同于自身的细胞。迄今，人们从哺乳动物的胚胎和发育中的未成年个体、成年个体的诸多脑区以及脊髓中都成功地分离了神经干细胞。
    目前，神经干细胞的分离方法主要有三种：无血清培养基自然筛选法、流失细胞术分选法、免疫磁珠分选法。我司采用的是无血清培养基自然筛选法。
    无血清培养基自然筛选法是迄今应用，也是zui简单和容易操作且行之有效的方法。其原理是利用特殊的培养基使成熟的神经细胞无法较长时间地成活，而分离筛选出能够在该培养条件下存活并增殖的神经干细胞群体。首先将含神经干细胞的神经组织通过机械或酶解分散等方法制备成单细胞，然后培养于含有特殊营养添加剂和促增殖因子的不含血清的培养液中。非神经干细胞在这种培养系统中由于营养缺陷无法较长时间地存活，而神经干细胞则适应该培养体系并在促增殖因子作用下生长增殖。因此，经过培养一段时间之后，就可获得通过这种自然筛选而增殖形成的呈神经球状生长的神经干细胞群体。这种利用特殊培养基自然筛选神经干细胞方法的优点是：简便易行，不需要特殊的仪器设备等条件，分离效率高，神经干细胞损伤小易于成活。
    神经干细胞在神经损伤及退行性病变等的替代治疗有很好的应用前景，但人类胚胎神经组织来源的神经干细胞由于来源及伦理问题，使其应用受到一定限制；应用成体中的骨髓、脂肪等组织中存在的基质细胞，经诱导可分化为神经干细胞，并经诱导分化可形成神经样细胞，由于其优点已引起广泛深入的研究。两者虽都可经诱导分化为神经样细胞，但毕竟骨髓来源与神经来源干细胞起源不同，其能力及特性仍有一定的差别。对于骨髓来源的神经干细胞，其是否能zui终形成发挥功能作用的神经细胞，尚需进行更深入、细致的实验研究。本实验室研制的Cytokine神经干细胞培养基，对胚鼠室管膜神经干细胞和骨髓来源的基质细胞进行诱导培养，均可形成形态相似的大圆细胞，经RA等诱导分化，均可形成神经样细胞，并表达神经细胞的标志蛋白，但两种不同来源的神经干细胞在增殖能力等很多方面均有不同，其在形态上有何差异，尝试以AFM来观察两种细胞，从形态上对两者进行初步的比较研究。
    我司分离培养神经干细胞的步骤大致如下：
    （1） 取胎脑。
    （2）加Trypsin/EDTA消化，用吸管吹吸使细胞均匀分散均匀。
    （3） 离心除去Trypsin/EDTA。
    （4）加神经干细胞*培养基培养。
    当神经球较大或出现细胞贴壁分化时应及时传代。传代经过大致为：去除培养液；PBS洗涤；Trypsin/EDTA消化；离心，去上清；神经干细胞*培养基重悬；按比例接种。