人淋巴细胞CIK（Cytokine-InducedKiller）治疗的液体培养基培养流程主要分为几个步骤，具体包括淋巴细胞的分离、培养、激活及扩增。以下是一个常见的培养流程：
1.样本收集与淋巴细胞分离
采集外周血：使用抗凝剂（如肝素）从患者或供体采集外周血。
分离外周血单核细胞（PBMC）：使用密度梯度离心（如Ficoll-Paque）分离出外周血单核细胞（PBMC）。
2.细胞激活
培养基选择：常用的培养基为RPMI-1640或IMDM培养基，加入10%胎牛血清（FBS）和1%青霉素/链霉素。
细胞激活剂：添加刺激淋巴细胞增殖的细胞因子，常见的细胞因子包括：
IL-2（白介素-2）：激活T细胞的增殖和扩增。
IFN-γ（干扰素-γ）：促进细胞毒性作用。
抗CD3抗体（如OKT3）或者其他T细胞受体激活剂。
抗CD28抗体：增强T细胞的激活反应。
激活过程通常在37°C、5%CO₂的条件下进行，培养时间为2-3天。
3.扩增培养
在激活后细胞需要继续扩增，通常会在培养基中添加更多的IL-2，以维持细胞的增殖。细胞数量一般会在3-5天内显著增加。
为了维持细胞活性和增殖，定期更换培养基（大约每两天一次），并补充IL-2。
4.细胞收获
细胞检测：使用流式细胞术检测CIK细胞的纯度和细胞毒性。
细胞培养结束后，通过离心收集细胞，进行后续的应用或治疗。此时CIK细胞通常已具有较强的细胞毒性活性。
5.质量控制
细胞鉴定：通过流式细胞术或PCR鉴定细胞的标志物，例如CD3、CD56、CD8等。
细胞功能测试：检测CIK细胞的细胞毒性活性，包括对肿瘤细胞的杀伤效果。
6.冻存（可选）
如果需要长期保存，可以将CIK细胞进行冻存。使用适当的冻存液（如含有DMSO的冻存液）进行低温保存。
培养基配方（常见示例）：
RPMI-1640培养基
10%FBS
1%青霉素/链霉素
10ng/mlIL-2（用于增殖和激活）
50ng/mlIFN-γ
抗CD3抗体（可选）
注意事项：
培养环境：保持37°C，5%CO₂环境，确保细胞生长良好。
细胞因子的添加：根据需要可以调整IL-2和IFN-γ的浓度，以优化细胞增殖和功能。
此流程为基础的CIK细胞培养流程，具体的实验细节可以根据不同的实验要求进行调整。
