ProteanFect：小鼠原代T细胞从提取到转染全流程攻略

实验前准备

1. 材料与试剂：新鲜小鼠脾脏、PBS缓冲液、无菌手术器械（剪刀、镊子等）、细胞过滤器、CD4/CD8磁珠分选试剂（如需纯化特定亚型），或阴选的方式去除B细胞、单核细胞、NK细胞的磁珠分选试剂，RPMI-1640培养基，人白介素2，胎牛血清，抗生素（如青霉素-链霉素）。
2. 设备：无菌操作台、离心机、磁力分选架。

从小鼠脾脏获取单细胞悬液

1. 小鼠颈椎脱臼处死，75%乙醇浸泡5分钟，取出小鼠置于无菌操作台上，左腹侧朝上。
2. 在小鼠左腹侧中部剪开小口，撕开皮肤暴露腹壁，可见红色长条状脾脏。
3. 在脾脏下侧提起腹膜，剪开后上翻，暴露脾脏，用镊子提起脾脏，眼科剪分离下面的结缔组织，取出脾脏，剥去周围的结缔组织，期间用含有2%FBS的PBS溶液保持脾脏湿润。
4. 将脾脏放于70UM过滤网中，用注射器针芯轻轻研压脾脏，用含2%FBS的PBS冲洗过滤网，获细胞悬液。
5. 300G离心5分钟，收集细胞沉淀，然后加入红细胞裂解液裂解，将红细胞充分裂解，收集白细胞。

从单细胞悬液中分离小鼠原代T细胞

1. 全T细胞分离：利用阴选的方式去除B细胞、单核细胞、NK细胞等，按照分选试剂盒的说明书进行。
2. 亚群分离（如需要CD4+或CD8+ T细胞）：
• 使用CD4或CD8磁珠（如MACS磁珠）分选获得特定T细胞亚群。
• 将磁珠标记的细胞悬液置于磁性分选装置中，分离出目标T细胞亚群。

培养与检测

1. 将分离的T细胞重悬于含10%胎牛血清的RPMI-1640培养基中，并加入抗生素与人白介素2。
2. 细胞密度一般控制在1-2×10^6 CELLS/ML，放入37°C、5% CO2培养箱中进行培养。

转染

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